#1
|
|||
|
|||
наборы СА125(стрипы со стрепавидином)
Уважаемые коллеги,подскажите.В новой серии Алкоровских наборов СА125 стрипы не с моноклональными АТ,а со стрепавидином,никаких изменений в методике нет,нормы теже,результаты высокие,контроль тоже
|
#2
|
|||
|
|||
До новой серии 3041 еще не дошел.
Стрептавидин позволяет увеличить чувствительность метода (моноклональные АТ есть) . В информационном листке сказано, что увеличен диапазон калибровки ( с 500 до 700). У меня только одно значение в этом диапазоне - 520, остальные либо ниже, либо более 1000. Инструкции старые, нормы, соответственно, тоже. На сколько выросли значения контрольного материала? |
#3
|
||||
|
||||
Коллега, Вы путаете специфические моноклональные антитела (реагирующие с СА125 сыворотки) с метками, предназначенными для визуализации реакции (пероксидаза в одних наборах, стрептавидин в других). Это незнание принципа ИФА. С этим надо что-то делать.
|
#4
|
||||
|
||||
При переходе на наборы с принципиально новой методикой (в данном случае - тест-системой) необходим период "перекрывания", когда пробы пациентов и контроли исследуются параллельно на обеих методиках. Количество серий (постановок) определяется загрузкой лаборатории и самой методикой.
И вот в этот период решаются все вопросы - работает ли методика, и если нет, то почему. |
#5
|
|||
|
|||
Уважаемая Александра Сергеевна,по Вашему ответу я поняла то,что вы не сталкивались с проблемой о которой я спрашивала.Принципы ИФА принципами,но ни о какой смене методики и смене тест систем речи не идёт,в наборах кроме этикеток на упаковке со стрипами ни какой разницы нет,а там именно так и написано -с моноклональными АТ на одних и с со стреповидином на других,хотелось бы узнать у коллег мнение по поводу этих тест систем,может у вас есть информация по другим аналитам.
спасибо,Ольга |
#6
|
|||
|
|||
стрипы со стрептавидином
[Ссылки доступны только зарегистрированным пользователям ] :
"Особого внимания заслу- живает вариант, когда используется комплекс стрептавидин- биотин. Такая схема обладает рядом преимуществ, важных для определения онкомаркера СА 15-3. Данная схема реализо- вана в российском наборе ОнкоИФА-СА 15-3 производства Алкор Био (г. Санкт-Петербург). На планшет нанесены молекулы стрептавидина. На первой стадии анализа в лунки добавляются калибровочные пробы, контрольная сыворотка, исследуемые образцы и конъюгат моноклональных антител с биотином. Благодаря биодоступ ности и высокому сродству стрептавидина к биотину, проис- ходит специфичное связывание данных молекул и образуется комплекс стрептавидин-биотин-моноклональное антитело к СА 15-3. На второй стадии после промывки планшета добав- ляется конъюгированные с пероксидазой антитела, специфич- ные к определенному эпитопу СА 15-3. Меченное ферментом антитело связывается с молекулами СА 15-3, которые были иммобилизованы во время первой инкубации. По окончании инкубации проводится промывка планшета, инкубация с ТМБ, остановка реакции и учет результатов. Реализация данной схемы иммуноферментного анализа для определения онкомаркера СА 15-3, благодаря большой спо- собности биотиновых молекул связываться со стрептавидином, позволяет значительно расширить диапазон определяемых кон- центраций (в наборе Алкор Био он составляет 0-400 Ед/мл) и максимально удалить границы хук-эффекта высоких кон- центраций. Такие аналитические характеристики тест-системы дают возможность работать с большим количеством сыворо- ток с высокой концентрацией СА 15-3 без предварительного разведения," [Ссылки доступны только зарегистрированным пользователям ] : "В лунки, покрытые стрептавидином, вносятся калибровочные пробы с известным содержанием РЭА, контрольные и анализируемые образцы. Затем добавляется раствор, представляющий собой смесь конъюгатов двух моноклональных антител к РЭА с различной эпитопной специфичностью. Первое антитело конъюгировано с биотином, второе антитело – с ферментом. В результате реакции между моноклональными антителами и молекулой РЭА образуется комплекс, который связывается со стрептавидином, иммобилизованным на стенках лунок. После окончания инкубации антитела, которые не связались с молекулами РЭА, удаляются путем промывки. Во время инкубации с ТМБ происходит окрашивание раствора. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации РЭА в образце." Из приведенных текстов не следует, что стрептавидин - некая метка, предназначенная для визуализации реакции |
#7
|
|||
|
|||
Цитата:
[Изображения доступны только зарегистрированным пользователям] [Изображения доступны только зарегистрированным пользователям] |
#8
|
|||
|
|||
Да я собственно, про это:
Цитата:
Вариантов ИФА масса, но тексты конкретно про наборы Алкор Био и про стрипы со стрепавидином, к которому (стрептавидину) никаких меток не прикреплено. |
#9
|
|||
|
|||
Три пробы, сделаны в дубле, контрольный материал двух уровней (сливная сыворотка).
СА125 №039 -старый набор, СА125__№Э041 - новый. Пробы____СА125__№039_______СА125__№Э041_ 1_________1,864____1,204_______4,044____3,537 2_________2,486____2,810_______5,598____6,498 3_________15,00____15,87_______16,43____17,40 км__Н_____6,380_______________7,604____ км__В_____110,7_______________137,1____ кс__своя___31,51_______________20,89____ кс__чужая_30,63_______________18,68____ Думал, что воспроизводимость в новых наборах лучше. Получилось то, что получилось. Инструкция, кстати, в месте описания принципа метода - новая. Протоколы |
#10
|
|||
|
|||
Assandra, а почему бы Вам не извинится перед коллегой из Саратова. В своем первом посте Olgazaitceva сказала то, что написано на коробке, плюс проблему с завышением результатов. У меня эти коробки есть. Все так и написано. А Вы обвинили ее в некомпетентности...
|
#11
|
|||
|
|||
В принципе многие вопросы разрешились бы после постановки аттестованых контрольных сывороток. Проблема только найти сыворотку, аттестованную данным методом.
В этих условиях наиболее полезным был бы звонок производителю. У них есть возможность оценить насколько адекватно отработали станадарты набора. |
#12
|
|||
|
|||
Еще 6 проб, сделанных обеими наборами.
Для части проб новый набор дал увеличение в 1,2-1,3 раза (как в прошлый раз). Для пробы 1 - почти в 3 раза, для пробы 6 - в 1,6 раза. Контрольный материал тоже увеличен. Не вижу какой-либо закономерности. Протоколы: |