Сгусток в сыворотке

[Egorichev]

Добрый день коллеги! Возникла проблема с сывороткой из диализных центров. Появляется крупный сгусток в сыворотке, иногда вся сыворотка, как желе. Кровь отбирается в вакуумную пробирку с гелем и активатором свертывания, затем часа через 2 курьер забирает в лабораторию, центрифугируем и через некоторое время сыворотка как желе. Диализников гепаринят, предполагаю, что это замедляет процесс оброзования сыворотки(переход фибриногена в фибрин), но как бороться непонятно.Может кто-то сталкивался с данной проблемой, подскажите как исправить ситуацию!

[Dr.Vad]

Теоретически - быть может после набирания крови следует перемешивать содержимое, чтобы активация свертывания крови происходила быстрее /полнее, использовать пробирки с более высокой концентрацией активатора крови, гепариназа, полибрен могут нейтрализовать гепарин в крови и способствовать отделению сгустка от сыворотки; теоретически пробирки с гепарином-лития (вместо гелевых с активатором) могут быть использованы для биохимического анализа.

[AlexT]

Для каких исследований нужен этот биоматериал?

[Egorichev]

Сообщение от AlexT

Для каких исследований нужен этот биоматериал?

Биохимия(креатинин, мочевая кислота, трансферрин, кальций) и гормоны(паратгормон), гематологию(там с ЭДТА) тоже обвиняют, говорят гемоглобин низкий, а больной резвый. Причем гематолог контролируется постоянно, вообще на анализаторы грех жаловаться. Они как-то с катетера забирают кровь.

[Egorichev]

Сообщение от Dr.Vad

Теоретически - быть может после набирания крови следует перемешивать содержимое, чтобы активация свертывания крови происходила быстрее /полнее, использовать пробирки с более высокой концентрацией активатора крови, гепариназа, полибрен могут нейтрализовать гепарин в крови и способствовать отделению сгустка от сыворотки; теоретически пробирки с гепарином-лития (вместо гелевых с активатором) могут быть использованы для биохимического анализа.

А как насчет, пробирок с тромбином вместо кремнезема в качестве активатора свертывания, если пользовались, не интерфирируют ли они биохимию и иммунохимию?

[AlexT]

Сообщение от Egorichev

Они как-то с катетера забирают кровь.

Проверьте процедуру получения крови:

Взятие проб крови из постоянных катетеров может привести к сложностям анализа и ошибочным его результатам из-за неполного промывания места взятия. Это приводит к контаминации образца лекарственными средствами, антикоагулянтами и/или разбавлению образца крови.

Поскольку катетеры обычно промываются физиологическим раствором для уменьшения риска тромбоза, их нужно промыть этим раствором и перед взятием проб крови для диагностических исследований. Перед взятием пробы нужно удалить из катетера достаточное количество крови, чтобы быть уверенным, что проба не разбавлена и не контаминирована. Объем удаляемой крови зависит от объема "мертвого пространства" конкретного катетера.

Взятие крови
Для исследований, кроме анализа коагуляции, кровь рекомендуется сливать в количестве двух объемов "мертвого пространства" катетера, а для исследования коагуляции - шести объемов "мертвого пространства" катетера (или 5 мл).

Таким образом, в случае, если необходимо взятие крови и на биохимические, и на коагулологические исследования, то первой всегда берется пробирка для биохимических исследований.

[AlexT]

Биохимические тесты можно проводить из пробирок с гепаринатом лития, паратгормон - надо посмотреть допустимые типы образцов в вашей тест-системе

Низкий гемоглобин подозрителен на разведение крови.

Я бы сравнил результаты из пробы из катетера и венозной при венепункции.

[Egorichev]

Сообщение от AlexT

Низкий гемоглобин подозрителен на разведение крови.

Берут на гемоглобин до гемодиализа, гиперволемия норм. явление, но их не устраивает цифра в 70 г/л(гематокрит занижен, СОЭ завышен) которая не соответствует физическому состоянию и проводимому лечению(эритропоэтины, препараты железа).Конечно возможна декомпенсация. Но я склоняюсь к неправильному забору, только доказать крайне трудно в условиях 2 чвсовой задержки до обработки пробы.

[Assandra]

Такие вопросы и мысли возникли по теме.

1. Какова СОЭ у тех пациентов, которые "резвые" при низком гемоглобине? Тут важно понять, чем разводится образец - гепарином, ускоряющим СОЭ, или физраствором, снижающим её. Судя по длительному образованию сгустка - все же гепарином. И скорее всего из катетера.

2. Зачем гель, если пробирки центрифугируете по месту анализа, а не забора крови (гель тогда в принципе не нужен).

3. Перемешивают ли пробирки сразу после взяти крови? (активатор свертывания лучше действует, то же предлагал Вадим Валерьевич в посте №2).

4. При какой температуре хранятся пробирки до отправки?

5. Теоретически - можно и с тромбином вместо кремнезема,также есть пробирки кремнезем+тромбин.

6. В качестве эксперимента можно добавить избыток тромбина (если таковой имеется) в одну аликвоту образца, вторую аликвоту оставить в качестве контроля и проследить за выпадением фибрина. Как-то так.

5. Лучший вариант - поехать в пункт забора и посмотреть на все своими глазами.

[Egorichev]

Сообщение от Assandra

Такие вопросы и мысли возникли по теме.

1. Какова СОЭ у тех пациентов, которые "резвые" при низком гемоглобине? Тут важно понять, чем разводится образец - гепарином, ускоряющим СОЭ, или физраствором, снижающим её. Судя по длительному образованию сгустка - все же гепарином. И скорее всего из катетера.

2. Зачем гель, если пробирки центрифугируете по месту анализа, а не забора крови (гель тогда в принципе не нужен).

3. Перемешивают ли пробирки сразу после взяти крови? (активатор свертывания лучше действует, то же предлагал Вадим Валерьевич в посте №2).

4. При какой температуре хранятся пробирки до отправки?

5. Теоретически - можно и с тромбином вместо кремнезема,также есть пробирки кремнезем+тромбин.

6. В качестве эксперимента можно добавить избыток тромбина (если таковой имеется) в одну аликвоту образца, вторую аликвоту оставить в качестве контроля и проследить за выпадением фибрина. Как-то так.

5. Лучший вариант - поехать в пункт забора и посмотреть на все своими глазами.

СОЭ у них завышен(40-50мм), собственно преаналитику отследить трудно, и пару дней назад пришла кровь - сыворотка на 95% желе. А если гепарин образует комплексы с тромбином и препятствует образованию нормального сгустка, то как потом сгусток образуется, если кремнезем только ускоряет его образование, но нет непосредственного участия(кремнезема) в образовании сгустка.

Буду пробовать пробирки с тромбином или с гепарином лития. Какие будут результаты, отпишусь в теме.

[Assandra]

Сообщение от Egorichev

А если гепарин образует комплексы с тромбином и препятствует образованию нормального сгустка, то как потом сгусток образуется, если кремнезем только ускоряет его образование, но нет непосредственного участия(кремнезема) в образовании сгустка.

не очень понятен вопрос.

Кремнезем активирует факторы свертывания, являясь твердой фазой для абсорбции и активации части из них, за счет этого ускоряется образование сгустка. Поэтому важно пробирку перемешать.

Гепарин ин виво стабилизирует комплекс тромбин-антитромбин (ТАТ), избыток тромбина, добавленного извне, или находящегося в пробирке в качестве активатора свертывания, не будет связан эндогенным АТ и займется образованием фибрина.

[Egorichev]

Сообщение от Assandra

не очень понятен вопрос.

Кремнезем активирует факторы свертывания, являясь твердой фазой для абсорбции и активации части из них, за счет этого ускоряется образование сгустка. Поэтому важно пробирку перемешать.

Гепарин ин виво стабилизирует комплекс тромбин-антитромбин (ТАТ), избыток тромбина, добавленного извне, или находящегося в пробирке в качестве активатора свертывания, не будет связан эндогенным АТ и займется образованием фибрина.

Если предположить что антитромбин+гепарин связал весь тромбин, то фибриноген не должен превратиться в фибрин и образовать желеобразный сгусток. Фибриноген должен остаться "в свободном плаванье". Вопрос в том , как кремнезем влияет на фибриноген?

[Assandra]

Сообщение от Egorichev

Если предположить что антитромбин+гепарин связал весь тромбин, то фибриноген не должен превратиться в фибрин и образовать желеобразный сгусток. Фибриноген должен остаться "в свободном плаванье". Вопрос в том , как кремнезем влияет на фибриноген?

Кремнезем никак не влияет на фибриноген.

В качестве доказательства присутствия в пробирке гепарина можно попробовать использовать протамина сульфат (продается в р-ре для в/в вливания).

[Dr.Vad]

Попробую обьяснить происходящее: кремнезем/каолин активирует фактор 12 - чем выше концентрация каолина и чем лучше перемешивается кровь, тем больше и быстрее образуется тромбин и фибриновый сгусток (по аналогии как при определении норм. АЧТВ); если в крови присутствует гепарин, то он через комплекс с антитромбином ингибирует активацию, как фактора 12, так и остальных коаг. факторов-протеаз, включая тромбин, что приводит к замедлению образования сгустка (как АЧТВ тест в присутствии гепарина). Необходимо учитывать след. момент: для образования фибрина-геля из фибриногена необходимо небольшое количество тромбина (30-50 нМ), тогда как для его прошивки фактором 13 (когда из Д-мономеров образуются Д-димеры) и образованием фибриновых нитей и ретракции сгустка нужно 5-7 кратное количество тромбина (150-250 нМ). В присутстви гепарина тромбина образуется меньше, поэтому фибрин-гель формируется, а фибриновый сгусток - нет. Как вариант ускорения: добавить больше каолина и перемешивать лучше; добавить тромбин (дороже), добавить ингибиторы гепарина (гепариназа, полибрен, протамин) - с последним поаккуратнее: в больших дозах также оказывает антикоагулянтное действие (блокириет тромбинообразование через угнетение активации фактора 5).

[Egorichev]

Благодарю коллеги, теперь ситуация ясна!