Сывороточное железо. Каковы min возможные значения?

[AlexPAR]

Забор крови проводим мы сами, редко когда пациент приходит с уже взятой кровью. Из стационара кровь бывает, но только на то, что там не делают (железо они сами делают).
К сожалению, тогда я не смотрел параллельные анализы тех пациентов (их могло и не быть - в поликлинике обнаружили низкий гемоглобин, и пациент пришел к нам делать железо). А сейчас это уже не сделать.
Я попробую сделать разведения сыворотки и калибратора.

[Assandra]

Калибратор железа у вас стандартный водный раствор или на основе сыворотки?

[AlexPAR]

Сделал разведения калибратора Рэндокс (R) в 10 и 20 раз. Пробу случайного пациента (P) - в 10 раз. Железо в Рэндоксе - 35,7. По калибратору из набора (30) и дист воде был сделан расчет. Было сделано два последовательных повтора. Randox, я полагаю, на основе сывортоки.
проба___Res____570_____700______570_____700______d Bl_____d Mix
30_____30,23___0,0509___0,0520___0,2141___0,0549___-0,0011___0,1592
30_____29,77___0,0505___0,0517___0,2117___0,0546___-0,0012___0,1571
___P___4,54____0,0814___0,0632___0,1295___0,0646___0,0182___0,064 9
___P___4,57____0,0818___0,0634___0,13_____0,0648___0,0184___0,0652
_P/10___0,50___0,0539___0,0525___0,0842___0,054____0,0014___0,0302
_P/10___0,47___0,0538___0,0526___0,0837___0,0538___0,0012___0,029 9
___R___37,48___0,1272___0,1252___0,3006___0,1062___0,002___0,1944
___R___33,37___0,1285___0,106___0,3037____0,107____0,0225___0,1967
_R/10___3,55___0,0881___0,0726___0,132____0,0742___0,0155___0,0578
_R/10___3,59___0,0869___0,0727___0,1306___0,0739___0,0142___0,056 7
_R/20___1,60___0,0507___0,0514___0,0861___0,0531___-0,0007___0,033
_R/20___1,76___0,0506___0,0518___0,0861___0,0529___-0,0012___0,0332
_вода___0,00___0,0707___0,0647___0,0985___0,0659___0,006____0,032 6
_вода___-0,02___0,0704___0,0647___0,0981___0,0659___0,0057___0,032 2

Вроде неплохо получилось.

[Assandra]

Сорри за непонимание, поясните, почему столбцов 570 нм и 700 нм по два и что такое в Вашем анализаторе d Bl_____d Mix

[AlexPAR]

Да, сменил обозначения, не подумав. В 10 посте я писал про две волны. Анализатор выдает только то, что выделено жирным, и результат, рассчитанный по калибровке, но на калибровку я времени не тратил, а провел расчет.
Более подробно с расчетом:
______________Бланк____Бланк_____проба____проба___ d бланка___d пробы_
проба___Res____570_____700______570_____700______d Bl_____d Mix
30_____30,23__0,0509__0,0520___0,2141___0,0549__-0,0011___0,1592

d бланка= 0,0509 -0,0520 = -0,0011
d пробы = 0,2141 - ,0549 = 0,1592
Дальнейшие расчеты:
DA = d пробы - d бланка = 0.1592 - (-0.011) = 0.1603
Res = DA*226,073-6,0135

[Assandra]

Сообщение от AlexPAR

Проделал анализы в воде деионз...

Вы здесь одну воду пропустили, за 25-е число, или не ставили? (Пост № 8)

[AlexPAR]

Деионизированная вода стояла на своей 1 позиции, но плохо воспроизвелась (надо 1 ячейку исключить из работы) и калибровку рассчитал по дист. воде. Соответствено, не дал по ней данных. Разведения делал деиониз. водой.

[Assandra]

Пациент опять с низким железом.
Кручу я Ваши данные и так, и этак, как в том анекдоте: купил сенокосилку и не могу собрать, как ни кручу - то автомат получается, то пулемет
Пациент у меня получается с железом 8,9, хоть на двух длина волн, хоть на одной. Фактор пересчета 18,5. Откуда взялась формула
Res = DA*226,073-6,0135?

[AlexPAR]

Пациент случайный.
Assandra, а как Вы получили 8,9? Если не трудно, покажите пожалуйста.
Я все тупо считаю в Exel. Жаль, что нельзя его файл прикрепить. Я обязательно выложу арифметические расчеты, как только соображу, как это сделать без компа.

[Assandra]

Считаем фактор пересчета по калибратору 30.
F= 30/(d пробы-d бланка)=30/(0,2129-0,507)=30/0,1622=185 (фактор пересчета, сорри, в предыдущем посте запятая не там).
Пациент (0,1298-0,0816)*185=0,0482*185=8,92
Это по одной длине волны (570).
По двум длинам — как в Ваших рассчетах в примере, DA (калибратор) = d пробы - d бланка = 0.1592 - (-0.011) = 0.1603, т.е. 30=F*0,1603, отсюда F=187, а пациент:
d бланка пациента=0,0182, d пробы пациента = 0,0651, DA=0,0469, Res = 0,0469* F=0,0469*187=8,77.
Теперь, если пересчитать пациента в разведении на фактор 187, мы линейность не получим (как и обещали производители), и еще, обратите внимание, что при низких концентрациях на незаявленной в методике длине волны,
например:
проба______Res______570_____700______570_____700__ ____d Bl_____d Mix
P/10___0,50 (5,37)___0,0539___0,0525___0,0842___0,054____0,001 4___0,0302,

абсорбции пробы и бланка почти одинаковы (а иногда бланк выше), это говорит о неспецифичности данной длины для оптической плотности реагентной смеси.

[AlexPAR]

Расчет F= 30/(d пробы-d бланка)=30/(0,2129-0,507)=30/0,1622=185 не понял. По двум длинам волн - понятно.

Расчет калибровки по воде (0) и калибратору (30).
DA(среднее)____Fe(мкмоль)
0,0266_________ 0,00
0,1593________ 30,00
Rez = k*DA - b
0.1593-0.0266=0.1327
30.0 - 0.0 = 30.0
k = 30.0/0.1327 = 226.073
b = 0.0266*266.073 = 6.0136
Анализатор рассчитывал по аналогичному уравнению, но за три года оно устарело.

Дочь расписала мне решение для подбора коэффициентов, но не буду его приводить. Реально я строю график в Exel, провожу линию тренда с выводом уравнения (точек может быть и больше).

Я не утверждаю, что калибровка нулевой точки по воде правильна, но в данном случае это работает.

[AlexPAR]

Сообщение от Assandra

обратите внимание, что при низких концентрациях на незаявленной в методике длине волны,
....
абсорбции пробы и бланка почти одинаковы (а иногда бланк выше), это говорит о неспецифичности данной длины для оптической плотности реагентной смеси.

Вспомогательная длина волны (700нм) и не должна быть специфичной для реагентной смеси. Ее задача реагировать на разные мешающие факторы (например поверхность ячейки) так же, как и основная, и минимально реагировать на пик основной длины волны. Вспомогательная у меня, правда, дальше, чем 100нм от основной (до 100нм рекомендует Долгов В.В. в книге "Фотометрия в лабораторной практике").
Впрочем, если калибровку пересчитать только для 570нм, то практически ничего не изменится, за исключением::37,48 станет 32,50; а 33,37 станет 32,90.
Двух волновому варианту я верю больше.

[Assandra]

Сообщение от AlexPAR

Расчет F= 30/(d пробы-d бланка)=30/(0,2129-0,507)=30/0,1622=185 не понял.

Здесь имеются ввиду абсорбции бланка и пробы калибратора с известной концентрацией 30 мкмоль/л. Предполагается, что бланк реагента по воде анализатор вычитает по умолчанию (у нас, по-крайней мере, так) и выдает значения абсорбции уже с поправкой на воду.

[Assandra]

Сообщение от AlexPAR

Расчет калибровки по воде (0) и калибратору (30).
DA(среднее)____Fe(мкмоль)
0,0266_________ 0,00
0,1593________ 30,00
Rez = k*DA - b
0.1593-0.0266=0.1327
30.0 - 0.0 = 30.0
k = 30.0/0.1327 = 226.073
b = 0.0266*266.073 = 6.0136

Смотрите, вы тут дважды воду вычитаете, сначала в виде абсорбции, а потом в пересчете на железо (и железа в воде 6 мкмоль/л). Вычитать из результата числовую поправку? Мне чудится здесь какое-то математическое несоответствие, надо еще подумать.

[AlexPAR]

Идею понял, но откуда взялось d пробы=0,2129 и d бланка=0,507 (30/(d пробы-d бланка)=30/(0,2129-0,507)?

Для проверки Res = DA*226,073-6,0135 достаточно подставить вместо DA 0,0266 или 0,1593, должно получится 0 или 30. В данное уравнение подставляется DA, то есть разница бланка и реагентной смеси с учетом в второй длины волны.